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急性肝衰竭大鼠血液及胃肠组织中胃动素、胃泌素含量的变化

热度0票  浏览106次 时间:2011年1月10日 09:34
【摘要】  目的 探讨胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)在急性肝衰竭(ALF)大鼠血液及胃肠组织中的含量变化及其与肝性胃肠功能障碍的相关性。方法 用硫代乙酰胺(TAA)复制出ALF大鼠模型,观察其一般情况及肝脏生化指标,放射免疫分析法(RIA)测定其血液及胃肠黏膜组织中MTL和GAS的含量。结果 ①模型组大鼠血液及胃黏膜组织中MTL、GAS含量及肠黏膜组织中MTL含量明显升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),肠黏膜组织中GAS含量下降,但无统计学意义;②直线相关分析显示,模型组血浆MTL、GAS含量与肝功能指标(ALT、AST)呈显著正相关关系 (P<0.01);③模型组大鼠造模后(24、36、48 h),随ALF病情及肝性胃肠功能障碍的进展,MTL、GAS含量呈进行性升高。结论 血中MTL、GAS含量测定既可作为判断肝功能损伤的指标,亦可作为判断ALF时胃肠功能障碍的指标。怎么发表论文

【关键词】  急性肝衰竭;胃动素;胃泌素;胃肠功能障碍

  ABSTRACT: Objective  To discuss the content changes of motilin (MTL) and gastrin (GAS) in acute liver failure (ALF) rats and their association with hepatic gastrointestinal dysfunction. Methods  We duplicated the ALF rats model with thioacetamide, and observed their general states of health and the liver biochemical indicators. The contents of MTL and GAS in their blood and the gastrointestinal mucosa were determined with the radio immunoassay. Results  ① The contents of MTL and GAS in blood and gastric mucosa of the ALF rats obviously elevated (P<0.01). And compared with that in the normal control group, the GAS content in the intestinal mucosa decreased, but had no significance. ② The straight line correlation analysis demonstrated positive correlation between the levels of MTL and GAS in blood and the damage of liver function (P<0.01). ③ The contents of MTL and GAS showed a positive correlation with the course, the pathogenetic condition of ALF and gastrointestinal dysfunction. Conclusion  The determination of MTL and GAS contents in blood can be an indicator to judge hepatic function impairment. It can also indicate the gastrointestinal dysfunction.怎么发表论文

  KEY WORDS: acute liver failure; motilin; gastrin; gastrointestinal dysfunction

  临床上重症肝炎时均伴有明显的胃肠功能障碍,肝病愈重,胃肠功能障碍愈严重,处理极为困难,且一旦出现胃肠功能衰竭,死亡率在90%以上。故寻找胃肠功能衰竭指标、及早发现胃肠功能障碍是防止病情发展的关键。胃动素(motilin, MTL)、胃泌素(gastrin, GAS)是调节胃肠运动的两种重要激素。目前,针对急性肝衰竭(acute liver failure, ALF)时胃肠激素的变化与肝性胃肠功能不全及肝功能的关系研究甚少。本文通过对急性肝衰竭时MTL、GAS含量的动态检测,探讨肝脏在上述激素代谢中的作用及临床意义,从而寻找ALF时胃肠功能障碍的早期诊断指标,为胃肠功能障碍在ALF的发生发展中的作用奠定理论依据。
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  1  材料与方法

  1.1  材料

  1.1.1  实验动物

  清洁级健康8周龄SD大鼠100只,雌雄各半,体重220-250 g,购自西安交通大学医学院实验动物中心。

  1.1.2  试剂和药物

  硫代乙酰胺(TAA)由天津市科密欧化学试剂开发中心提供(生理盐水配成40 g/L);生理盐水、盐酸、氢氧化钠由西安交通大学医学院设备科提供;抑肽酶、EDTA-Na2、MTL放免试剂盒由北京解放军总医院科技开发中心东亚免疫所提供;GAS放免试剂盒由北京北方生物技术有限公司提供。

  1.1.3  仪器设备

  分析天平、DL-46RC大容量低速冷冻离心机(上海中科生物医学高科技开发有限公司)、免疫计数器(西安开普机电有限责任公司)、组织匀浆机(YQ-3型)均由西安交通大学医学院第一附属医院生化室提供。怎么发表论文

  1.2  方法

  1.2.1  动物分组及造模
 
  SD大鼠100只,随机平均分为正常对照组(简称对照组)和急性肝衰竭组(简称模型组),两组动物均于实验前3 d用全价营养配合颗粒饲料进行喂养。3 d后模型组腹腔注射TAA 350 mg/kg,24 h后按原剂量重复注射一次;对照组腹腔注射等量生理盐水,24 h后重复一次。于造模后两组各取10只大鼠观察其临床表现。

  1.2.2  肝功能检测

  分别于造模后12、24、36、48 h从两组各取10只大鼠,摘眼球取血2 mL,沉淀离心取血清,采用全自动生化分析仪测定。

  1.2.3  血浆中MTL、GAS的检测

  采用放射免疫分析法,严格按说明书操作。分别于造模后12、24、36、48 h从两组各取10只大鼠摘眼球取血4 mL,各2 mL分别置于含30 μL 10%(体积分数)的EDTA-Na2和30 μL抑肽酶的塑料管中,混匀,4 ℃离心(1 500 r/min),取血浆置-20 ℃冰箱保存。为避免血浆中冷凝蛋白对测定干扰,测定时血浆复溶后,混匀,4 ℃离心,取上清液测定。怎么发表论文

  1.2.4  胃肠组织中MTL、GAS的检测

  采用放射免疫分析法,严格按说明书操作。于造模后48 h两组大鼠取血后脱臼处死,立即剖腹,分别留取胃黏膜(胃窦部)及上段空肠黏膜约300 mg,称重后,加生理盐水1-2 mL置于水浴锅中煮沸3 min,冷却后加1 mol/L冰醋酸0.5 mL,于匀浆器中制成匀浆,再用1 mol/L的氢氧化钠0.5 mL中和,4 ℃离心(3 500r/min,15 min)取上清液,置-70 ℃冰箱保存。

  1.3  统计学处理

  应用SPSS13.0统计软件包进行数据的统计学分析。测定数据均用(x±s)表示,组间比较采用独立样本t检验;MTL、GAS与肝功能指标之间的关系行直线相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

  2  结果

  2.1  临床观察

  对照组大鼠活动自如,反应灵敏,自由饮食,大小便正常。模型组大鼠腹腔注射TAA后12 h出现进食减少(以剩余的食物和水份为指标);24 h进食明显减少,腹部膨隆,可见胃肠型,动作迟缓(活动减少、四肢无力、行动缓慢),对声音、被动体位的改变反应减弱;36 h上述症状和体征明显加重;48 h拒食,腹部高度膨隆,可见明显的胃肠型,精神萎糜、嗜睡、共济失调(行走歪斜)、反应迟钝、疼痛反应减弱;60 h已无疼痛反应,昏睡、昏迷。此外,还有毛发疏散竖立、小便黄、鼻出血等症状。同时,于48 h大鼠取血处死,进行胃肠组织中MTL与GAS检测时,肉眼观察胃肠道明显扩张,腔内充满未消化的食物、液体、气体,肠壁水肿、充血。怎么发表论文

  2.2  肝功能检测结果
 
  于不同时间点与正常组比较,模型组大鼠的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶 (AST)、总胆红质(TBIL)都明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。且随着时间的推移,ALT、AST、TBIL水平呈逐渐升高的趋势,AST升高较ALT更明显(表1)。表1  不同时间点两组ALT、AST、TBIL的检测结果(略)

  2.3  两组血浆MTL、GAS的含量变化的比较

  与正常组比较,模型组12 h血浆中MTL、GAS含量无明显变化(P>0.05);24、36、48 h血浆中MTL、GAS含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),且随时间的推移其含量逐渐升高(表2)。表2  不同时间点两组血浆中MTL、GAS的含量比较(略)
2.4  两组胃肠黏膜组织中MTL、GAS的含量比较

  与正常组比较,模型组胃窦黏膜中MTL、GAS含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),空肠黏膜中MTL含量明显升高 (P<0.01),差异有统计学意义,GAS含量无明显变化(P>0.05,表3)。表3  两组胃、肠黏膜组织中MTL、GAS的含量比较(略)

  2.5  血浆MTL、GAS与ALT、AST的相关性

  直线相关性分析显示,模型组48 h血浆MTL、GAS与ALT、AST之间呈直线正相关关系(r=0.83、r=0.84、r=0.71、r=0.76,P均<0.01),且随肝功能损伤的逐渐加重,MTL、GAS水平呈逐渐升高趋势。

  3  讨论

    本实验结果显示,ALF大鼠血液及胃黏膜组织中MTL、GAS及空肠黏膜组织中MTL明显升高(P<0.01),且血液MTL、GAS含量与 ALT、AST水平之间呈直线正相关关系(P均<0.01),说明MTL、GAS与肝功能损伤程度密切相关。同时,模型组在疾病的早期,即注射 TAA后24 h,大鼠出现拒食、腹部膨隆、动作迟缓、毛发耸立,对声音、被动体位改变的反应减弱时,MTL、GAS已明显增高,提示ALF早期肝性脑病的症状尚不明显时MTL、GAS已升高。本实验结果还显示,模型组大鼠分别于造模后24、36、48 h,随ALF病程、病情的不断进展,MTL、GAS呈进行性增高,即肝损害程度越重,肝性脑病的症状越明显,血浆MTL、GAS含量就越高。本结果与文献报道一致[1-5]。因此,测定血浆MTL、GAS含量可作为判断肝功能的指标之一,对ALF时肝损害程度、病情具有一定临床指导意义。
  
  目前对于胃肠功能障碍在危重病的发生、发展中的作用越来越受到重视,寻找胃肠功能障碍指标,及早发现胃肠功能障碍是防止病情发展的关键。然而对于ALF时胃肠功能障碍的实验室指标报道甚少。本实验结果表明,ALF大鼠随着肝功能损伤及肝性脑病的进行性加重,胃肠功能障碍也随之加重。造模后48 h大鼠精神萎糜、嗜睡、共济失调(行走歪斜)、反应迟钝、疼痛反应减弱,同时出现拒食、腹部高度膨隆,可见明显的胃肠型,肉眼观察胃肠道明显扩张,腔内充满未消化的食物、液体、气体,肠壁水肿、充血等胃肠功能衰竭的表现。同时血浆、胃窦黏膜中MTL、GAS及空肠黏膜中MTL明显升高 (P<0.01),说明MTL、GAS与ALF时的胃肠功能障碍密切相关。因此,测定血浆MTL、GAS可作为判断ALF时胃肠功能障碍的指标之一;同时观察其血浆含量的动态变化对病情的判断及预后估计有一定的指导意义,从而指导临床进行早期预防性的治疗。
  
  ALF时MTL、GAS明显升高的机制可能为:①ALF性肝衰竭时肝细胞大片坏死,肝脏功能减弱甚至消失,经肝脏灭活的MTL、GAS减少,激素半衰期延长,导致MTL、GAS升高。②ALF大鼠胃肠道明显扩张,腔内充满未消化的食物、液体、气体,肠壁水肿、充血等,由于张力增加反馈性使MTL分泌增加,以促进胃肠活动和内容物的运行;同时胃肠道内环境失调及某些毒素或代谢产物的蓄积亦可抑制胃肠道平滑肌MTL受体的敏感性,这些因素可能导致血浆 MTL水平反馈性增高。缺血、缺氧使胃肠黏膜最易受累,胃肠蠕动减少,机体调动代偿机制使MTL分泌增加[6]。胃和肠壁水肿、充血,消化间期胃肠动力降低,致MTL分泌增加。③肝脏受损时自身迷走神经兴奋性增高刺激Gas分泌,而Gas的持续增高使幽门括约肌张力下降,十二指肠液及胆汁返流入胃,使胃窦部的pH值升高,pH值增高又刺激G细胞进一步分泌Gas[7]。本实验结果也证实了这一点。④危重症时机体对应激反应大量释放应激激素[6],如促肾上腺皮质激素、糖皮质激素、肾上腺素等,而应激激素的释放又会引起胃肠肽水平的变化。研究表明,肾上腺素能促进GAS、胰高血糖素、生长抑素的释放,同时应激状态下也可引起GAS分泌增加,高促胃液素亦可能刺激Mo细胞释放MTL。
     
  故上述两种胃肠激素的变化可进一步解释ALF时胃肠功能障碍一方面与肝功能衰竭有关,另一方面与MTL、GAS代谢紊乱有关。其具体作用机制尚需进一步的实验研究来明确。

【参考文献】
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