铁心甘草醇提物对小鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及其机制探讨
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时间：2011年3月18日 10:12
【摘要】 目的 观察铁心甘草醇提物对小鼠离体子宫平滑肌收缩运动的影响及作用机制。方法 雌性未孕小鼠，己烯雌酚致敏后，制备离体子宫标本，观察铁心甘草醇提物对离体子宫平滑肌的作用，以及加入盐酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉明、盐酸维拉帕米、吲哚美辛对铁心甘草作用的影响。结果 铁心甘草醇提物(0.4、0.6、0.8g/L)可显著抑制未孕小鼠离体子宫平滑肌的自发性收缩活动。盐酸维拉帕米和吲哚美辛对铁心甘草舒张小鼠离体子宫平滑肌的作用具有显著性影响。甲磺酸酚妥拉明可增加铁心甘草的作用时间，但不能增加铁心甘草的作用强度。盐酸苯海拉明对铁心甘草抑制子宫平滑肌的作用无显著性影响。结论 铁心甘草醇提物具有松弛小鼠离体子宫平滑肌的作用，该作用可能与α受体、抑制细胞内钙库释放及抑制前列腺素的合成和释放有关。发表论文期刊网
【关键词】 铁心甘草醇提物 小鼠 子宫平滑肌 机制
铁心甘草为豆科植物甘草的根和根茎心部部分，质地坚硬呈紫黑色，产于西北各省区，我区主产于盐池、灵武等县。微苦、甘、平。功能和中缓急、理气止痛。民间用于治疗急性肠炎、胃炎、呕吐、腹泻及妇女痛经等［1］。侯玲玲、赵自强等研究显示，此药用于治疗痛经具有良好的临床疗效［2］。本研究观察铁心甘草醇提物对小鼠子宫平滑肌的作用并对其作用机制进行初步的探讨。
1 材料与方法
1.1 动物 昆明种小鼠60只，雌性，未孕，体重25～30g。由宁夏医科大学实验动物中心提供。
1.2 仪器 Biolap 420E+生物信号采集系统(成都泰盟科技有限公司)，FT-100 生物张力传感器(成都泰盟科技有限公司)，超级恒温水浴(KAYAGAKI IRIKA KOGYO CO.LTD.)。
1.3 药品及制备 铁心甘草醇提物(宁夏药检所王英华提供)，己烯雌酚注射液(天津金耀氨基酸有限公司，批号：12020536)，盐酸苯海拉明注射液(天津市和平制药厂，批号：800712)，甲磺酸酚妥拉明注射液(上海旭东海普药业有限公司，批号：31020589)，盐酸维拉帕米注射液(上海禾丰制药有限公司，批号：31021343)，吲哚美辛(上海第十七制药厂，批号：840303)。吲哚美辛于50g/L的NaOH溶液中溶解后，以10mol/L盐酸滴定至 pH为7.4。4种药品分别制备为2×10-6 mol/L、2×10-6 mol/L、2×10-7 mol/L、2×10-5 mol/L终浓度的溶液。
1.4 实验方法 实验前3d，按 0.025mg/10g 体重给小鼠腹腔注射己烯雌酚，隔天1次，共2次，以提高子宫对药物的敏感性。用颈椎脱臼法将小鼠处死，剪开腹腔，揭起肠管及网膜，可见淡粉色的索状子宫，左右各一。轻轻分离，然后结扎两侧子宫远近端，剪断底部，取出子宫置于含5mL Kreb's液的恒温浴槽内，将子宫一端固定在玻璃挂钩上，另一端与张力传感器相连，张力调到0.5g。恒温浴槽内的温度保持(37±0.5)℃，并不断通入95％氧气＋5％二氧化碳的混合气体，60～70个气泡/min。
将子宫标本随机分为三组：正常对照组、铁心甘草组及受体拮抗剂+铁心甘草组。各组待子宫的自发活动平稳30min后，记录给药前正常的子宫收缩曲线10min，然后各组分别加入不同的药物。子宫平稳的自发活动(即不加入任何药物)为正常对照组，累计加入铁心甘草醇提物(以下简称铁心甘草)100 g/L 10μL使其终浓度(指溶于浴槽中5mL溶液后的浓度)分别为0.2、0.4、0.6、0.8 g/L，为铁心甘草组。受体拮抗剂+铁心甘草组即：子宫的自发活动平稳后分别加入盐酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉明、盐酸维拉帕米、吲哚美辛5min后，再加入铁心甘草(0.6 g/L)。用 Biolap 420E+生物信号采集系统记录子宫平滑肌收缩运动，各组分别观察和记录给药前后5min内的子宫平滑肌收缩的频率、幅度和收缩间隔的持续时间，进行比较。
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1.5 统计学方法 数据以(±s)表示，使用SPSS 10.0软件进行方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 铁心甘草对小鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响
与正常对照组相比，铁心甘草随剂量增加可逐渐减弱子宫平滑肌自发收缩运动，收缩波的频率减慢，振幅减小，收缩波间隔的持续时间增加，见表1。
表1 铁心甘草对小鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响（略）
*与对照组比较*P＜0.05
2.2 使用拮抗剂后铁心甘草对小鼠离体子宫平滑肌作用的影响
盐酸维拉帕米和吲哚美辛均可增强铁心甘草抑制子宫平滑肌的作用，表现为子宫平滑肌的收缩频率减小、收缩振幅降低及收缩波间隔的持续时间延长，其与铁心甘草组相比差异均具有统计学意义；α受体阻断剂甲磺酸酚妥拉明可延长子宫平滑肌收缩间隔的持续时间，而对收缩频率和收缩振幅均无显著性影响；H1受体阻断剂盐酸苯海拉明，可减弱铁心甘草对子宫平滑肌的作用，表现为收缩振幅增大，且收缩频率和收缩波间隔的持续时间与铁心甘草组相比差异无统计学意义，见表2。
表2 使用拮抗剂后铁心甘草对小鼠离体子宫平滑肌作用的影响（略）
与铁心甘草组比较*P＜0.05；与正常对照组比较△P＜0.05
3 讨论
原发性痛经是由于各种原因导致子宫肌肉不规则痉挛性收缩而引起，目前医学界对其发病机制还不完全清楚，但普遍认为痛经的发生与体内前列腺素F2α(p rostaglandinF2α，PGF2α)、缩宫素(催产素，oxytocin)、血管加压素等过高引起子宫过度收缩有关［7-8］。痛经患者普遍伴随子宫过度收缩、宫内压升高、子宫局部缺血和血流不畅，以及由此所引起的下腹部疼痛等症状。铁心甘草具有缓急、止痛之功。动物实验证明，铁心甘草对动物离体和在体的子宫平滑肌均具有明显的舒张作用，并能对抗催产素和MPGF2α引起的子宫剧烈收缩［1-2］。实践证明，铁心甘草对痛经及痛经伴发的胃肠道反应有可靠的治疗作用［2］。本实验结果显示，铁心甘草醇提物可抑制小鼠离体子宫平滑肌的自发收缩活动。加入α受体阻断剂甲磺酸酚妥拉明后，子宫平滑肌收缩间隔的持续时间延长，且与铁心甘草组相比具有统计学意义，但其收缩频率和收缩振幅与铁心甘草组相比均无统计学意义，因此，提示为甲磺酸酚妥拉明可增加铁心甘草作用的时间，但不能增加铁心甘草的作用强度，其作用机制也可能与α受体有关。在加入前列腺素合成酶抑制剂吲哚美辛后，铁心甘草的抑制作用与铁心甘草组相比差异有统计学意义，提示铁心甘草的抑制作用可能也与前列腺素的合成与释放有关。在使用L型电压依从性Ca2＋通道(L-VDCC)阻断剂盐酸维拉帕米后，与铁心甘草组相比，铁心甘草舒张子宫平滑肌的作用亦具有统计学意义，提示铁心甘草的抑制作用也可能与抑制细胞内钙库释放有关。有报道［9］，细胞外Ca2＋主要通过L-VDCC进入细胞内，该通道常随动作电位的发生而开放。L-VDCC是平滑肌兴奋收缩耦联的重要部分，胞浆内游离Ca2＋浓度是肌肉收缩蛋白活动的决定性调节剂［5］。加入H1受体阻断剂盐酸苯海拉明后，离体子宫平滑肌收缩的振幅加大，并且其收缩频率和收缩波间隔的持续时间与铁心甘草组相比均无统计学意义，提示铁心甘草的抑制作用与H1受体无关。本实验结果提示，铁心甘草醇提物抑制小鼠子宫平滑肌收缩运动的作用可能与α受体及通道L-VDCC使平滑肌细胞内Ca2＋浓度降低有关，也与前列腺素的合成与释放有关。
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【参考文献】
［1］ 赵自强，高保京，韩生银，等.铁心甘草对大鼠离体子宫的作用研究［J］.宁夏医学院学报，1996，18(1)：20-23.
［2］ 赵自强，牛阳，韩生银，等.铁心甘草治疗痛经药理作用的实验研究［J］.中国中医药科技，1995，2(6)：26-27.
［3］ 李志强，马力扬，徐敬东，等.香附对未孕大鼠离体子宫肌收缩的影响［J］.西安交通大学学报(医学版)，2007，28(4)：399-400.
［4］ 徐敬东，王文，秦晓民.远志增强未孕大鼠子宫平滑肌运动的机制研究［J］.中国中药杂志，2005，30(4)：295-297.
［5］ 徐敬东，王文，杨惠霞，等.延胡索对未孕大鼠离体子宫平滑肌运动的抑制作用［J］.中国组织工程研究与临床康复，2007，11(21)：4178-4181.
［6］ 赵丁，詹文红，李连怀，等.生化汤提取物对正常未孕、雌激素预处理及产后小鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响［J］.中国中药杂志，2006，31(3)：243
［7］ Lundstrêm V，Gréen K.Endogenous levels of prosta2 glandin F2alpha and itsmain metabolites in plasma and endometrium of normal and dysmenorrheic women［J］.Am J Obstet Gynecol，1978，130(6)：640-646.
［8］ AkerlundM.Involvement of oxytocin and vasop ressin in the pathophysiology of preterm labor and primary dys2 menorrhea［J］.Prog Brain Res，2002，139(4)：359-365.
［9］ Zhenyu C，Qinghuiqi，LixinL，et al.Effects of emodin on Ca2+ signal transduction of smooth muscle cells in multiple organ dysfunction syndrome［J］.J Surg Res，2006，131(1)：80-85.发表论文期刊网
【关键词】 铁心甘草醇提物 小鼠 子宫平滑肌 机制
铁心甘草为豆科植物甘草的根和根茎心部部分，质地坚硬呈紫黑色，产于西北各省区，我区主产于盐池、灵武等县。微苦、甘、平。功能和中缓急、理气止痛。民间用于治疗急性肠炎、胃炎、呕吐、腹泻及妇女痛经等［1］。侯玲玲、赵自强等研究显示，此药用于治疗痛经具有良好的临床疗效［2］。本研究观察铁心甘草醇提物对小鼠子宫平滑肌的作用并对其作用机制进行初步的探讨。
1 材料与方法
1.1 动物 昆明种小鼠60只，雌性，未孕，体重25～30g。由宁夏医科大学实验动物中心提供。
1.2 仪器 Biolap 420E+生物信号采集系统(成都泰盟科技有限公司)，FT-100 生物张力传感器(成都泰盟科技有限公司)，超级恒温水浴(KAYAGAKI IRIKA KOGYO CO.LTD.)。
1.3 药品及制备 铁心甘草醇提物(宁夏药检所王英华提供)，己烯雌酚注射液(天津金耀氨基酸有限公司，批号：12020536)，盐酸苯海拉明注射液(天津市和平制药厂，批号：800712)，甲磺酸酚妥拉明注射液(上海旭东海普药业有限公司，批号：31020589)，盐酸维拉帕米注射液(上海禾丰制药有限公司，批号：31021343)，吲哚美辛(上海第十七制药厂，批号：840303)。吲哚美辛于50g/L的NaOH溶液中溶解后，以10mol/L盐酸滴定至 pH为7.4。4种药品分别制备为2×10-6 mol/L、2×10-6 mol/L、2×10-7 mol/L、2×10-5 mol/L终浓度的溶液。
1.4 实验方法 实验前3d，按 0.025mg/10g 体重给小鼠腹腔注射己烯雌酚，隔天1次，共2次，以提高子宫对药物的敏感性。用颈椎脱臼法将小鼠处死，剪开腹腔，揭起肠管及网膜，可见淡粉色的索状子宫，左右各一。轻轻分离，然后结扎两侧子宫远近端，剪断底部，取出子宫置于含5mL Kreb's液的恒温浴槽内，将子宫一端固定在玻璃挂钩上，另一端与张力传感器相连，张力调到0.5g。恒温浴槽内的温度保持(37±0.5)℃，并不断通入95％氧气＋5％二氧化碳的混合气体，60～70个气泡/min。
将子宫标本随机分为三组：正常对照组、铁心甘草组及受体拮抗剂+铁心甘草组。各组待子宫的自发活动平稳30min后，记录给药前正常的子宫收缩曲线10min，然后各组分别加入不同的药物。子宫平稳的自发活动(即不加入任何药物)为正常对照组，累计加入铁心甘草醇提物(以下简称铁心甘草)100 g/L 10μL使其终浓度(指溶于浴槽中5mL溶液后的浓度)分别为0.2、0.4、0.6、0.8 g/L，为铁心甘草组。受体拮抗剂+铁心甘草组即：子宫的自发活动平稳后分别加入盐酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉明、盐酸维拉帕米、吲哚美辛5min后，再加入铁心甘草(0.6 g/L)。用 Biolap 420E+生物信号采集系统记录子宫平滑肌收缩运动，各组分别观察和记录给药前后5min内的子宫平滑肌收缩的频率、幅度和收缩间隔的持续时间，进行比较。
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1.5 统计学方法 数据以(±s)表示，使用SPSS 10.0软件进行方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 铁心甘草对小鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响
与正常对照组相比，铁心甘草随剂量增加可逐渐减弱子宫平滑肌自发收缩运动，收缩波的频率减慢，振幅减小，收缩波间隔的持续时间增加，见表1。
表1 铁心甘草对小鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响（略）
*与对照组比较*P＜0.05
2.2 使用拮抗剂后铁心甘草对小鼠离体子宫平滑肌作用的影响
盐酸维拉帕米和吲哚美辛均可增强铁心甘草抑制子宫平滑肌的作用，表现为子宫平滑肌的收缩频率减小、收缩振幅降低及收缩波间隔的持续时间延长，其与铁心甘草组相比差异均具有统计学意义；α受体阻断剂甲磺酸酚妥拉明可延长子宫平滑肌收缩间隔的持续时间，而对收缩频率和收缩振幅均无显著性影响；H1受体阻断剂盐酸苯海拉明，可减弱铁心甘草对子宫平滑肌的作用，表现为收缩振幅增大，且收缩频率和收缩波间隔的持续时间与铁心甘草组相比差异无统计学意义，见表2。
表2 使用拮抗剂后铁心甘草对小鼠离体子宫平滑肌作用的影响（略）
与铁心甘草组比较*P＜0.05；与正常对照组比较△P＜0.05
3 讨论
原发性痛经是由于各种原因导致子宫肌肉不规则痉挛性收缩而引起，目前医学界对其发病机制还不完全清楚，但普遍认为痛经的发生与体内前列腺素F2α(p rostaglandinF2α，PGF2α)、缩宫素(催产素，oxytocin)、血管加压素等过高引起子宫过度收缩有关［7-8］。痛经患者普遍伴随子宫过度收缩、宫内压升高、子宫局部缺血和血流不畅，以及由此所引起的下腹部疼痛等症状。铁心甘草具有缓急、止痛之功。动物实验证明，铁心甘草对动物离体和在体的子宫平滑肌均具有明显的舒张作用，并能对抗催产素和MPGF2α引起的子宫剧烈收缩［1-2］。实践证明，铁心甘草对痛经及痛经伴发的胃肠道反应有可靠的治疗作用［2］。本实验结果显示，铁心甘草醇提物可抑制小鼠离体子宫平滑肌的自发收缩活动。加入α受体阻断剂甲磺酸酚妥拉明后，子宫平滑肌收缩间隔的持续时间延长，且与铁心甘草组相比具有统计学意义，但其收缩频率和收缩振幅与铁心甘草组相比均无统计学意义，因此，提示为甲磺酸酚妥拉明可增加铁心甘草作用的时间，但不能增加铁心甘草的作用强度，其作用机制也可能与α受体有关。在加入前列腺素合成酶抑制剂吲哚美辛后，铁心甘草的抑制作用与铁心甘草组相比差异有统计学意义，提示铁心甘草的抑制作用可能也与前列腺素的合成与释放有关。在使用L型电压依从性Ca2＋通道(L-VDCC)阻断剂盐酸维拉帕米后，与铁心甘草组相比，铁心甘草舒张子宫平滑肌的作用亦具有统计学意义，提示铁心甘草的抑制作用也可能与抑制细胞内钙库释放有关。有报道［9］，细胞外Ca2＋主要通过L-VDCC进入细胞内，该通道常随动作电位的发生而开放。L-VDCC是平滑肌兴奋收缩耦联的重要部分，胞浆内游离Ca2＋浓度是肌肉收缩蛋白活动的决定性调节剂［5］。加入H1受体阻断剂盐酸苯海拉明后，离体子宫平滑肌收缩的振幅加大，并且其收缩频率和收缩波间隔的持续时间与铁心甘草组相比均无统计学意义，提示铁心甘草的抑制作用与H1受体无关。本实验结果提示，铁心甘草醇提物抑制小鼠子宫平滑肌收缩运动的作用可能与α受体及通道L-VDCC使平滑肌细胞内Ca2＋浓度降低有关，也与前列腺素的合成与释放有关。
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【参考文献】
［1］ 赵自强，高保京，韩生银，等.铁心甘草对大鼠离体子宫的作用研究［J］.宁夏医学院学报，1996，18(1)：20-23.
［2］ 赵自强，牛阳，韩生银，等.铁心甘草治疗痛经药理作用的实验研究［J］.中国中医药科技，1995，2(6)：26-27.
［3］ 李志强，马力扬，徐敬东，等.香附对未孕大鼠离体子宫肌收缩的影响［J］.西安交通大学学报(医学版)，2007，28(4)：399-400.
［4］ 徐敬东，王文，秦晓民.远志增强未孕大鼠子宫平滑肌运动的机制研究［J］.中国中药杂志，2005，30(4)：295-297.
［5］ 徐敬东，王文，杨惠霞，等.延胡索对未孕大鼠离体子宫平滑肌运动的抑制作用［J］.中国组织工程研究与临床康复，2007，11(21)：4178-4181.
［6］ 赵丁，詹文红，李连怀，等.生化汤提取物对正常未孕、雌激素预处理及产后小鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响［J］.中国中药杂志，2006，31(3)：243
［7］ Lundstrêm V，Gréen K.Endogenous levels of prosta2 glandin F2alpha and itsmain metabolites in plasma and endometrium of normal and dysmenorrheic women［J］.Am J Obstet Gynecol，1978，130(6)：640-646.
［8］ AkerlundM.Involvement of oxytocin and vasop ressin in the pathophysiology of preterm labor and primary dys2 menorrhea［J］.Prog Brain Res，2002，139(4)：359-365.
［9］ Zhenyu C，Qinghuiqi，LixinL，et al.Effects of emodin on Ca2+ signal transduction of smooth muscle cells in multiple organ dysfunction syndrome［J］.J Surg Res，2006，131(1)：80-85.发表论文期刊网
